在为寡核苷酸药物开发提供服务的过程中，我们经常接到客户的咨询：寡核苷酸药物的免疫原性是否有必要评估？如果要做，应该怎么做？做到什么度？今天，我们为您揭晓……

★ 文章导览★

研讨会上来自转化与精准医学部临床药理学办公室(Division of Translational and Precision Medicine, Office of Clinical Pharmacology)Bart Rogers 博士介绍了 FDA 对于寡核苷酸药物免疫原性风险监管和监督的基本考虑。本节对报告主要内容进行梳理，并加入了鼎泰集团生物分析团队深入学习后整理的学习笔记。

什么是 RNA 寡核苷酸

RNA 寡核苷酸的特点：

寡核苷酸药物通常由化学合成的短链 RNA 或 DNA 组成（目前批准上市的药物约为 20-40 mer），与目标 RNA 配对结合后，利用内源性核酸酶降解目标 RNA 或通过立体阻断核糖体机制调节 RNA 剪接和翻译过程，从而达到治疗疾病目的。寡核苷酸药物通常由化学合成制备，但分子量较大，作用机理较传统化学小分子机理复杂，并涉及特定的代谢和免疫途径。

寡核苷酸安全工作组（OSWG，Oligonucleotide Safety Working Group）根据寡核苷酸分子结构特点和递送方式对已经批准和在研的产品归类划分为不同的平台（如图2），相同平台生产的寡核苷酸在分子结构、序列长度、化学骨架、化学修饰、偶联物和/或制剂处方方面有相似的性质^[1]。

为什么选择 RNA 寡核苷酸

寡核苷酸产品的潜在优势：

寡核苷酸药物毒性来源及其与免疫原性的关系

FDA 批准的 RNA 寡核苷酸药物

截至 2023 年 FDA 批准的 RNA 寡核苷酸药物已有 17 款（截至发文时，该数字进一步提高为 22 个）。

FDA 已批准寡核苷酸药物免疫原性经验汇总

寡核苷酸药物免疫原性相关白皮书及指南

◆ OSWG 2022 年发表了关于寡核苷酸药物免疫原性评估的相关建议^[2]

文章概述了寡核苷酸药物免疫原性评估策略，指出其整体免疫原性风险较低，但需结合药物结构、递送系统和临床数据系统监测 ADA，以平衡药物开发的安全性和有效性。

◆ FDA 于 2024年6月发布的《Clinical Pharmacology Considerations for the Development of Oligonucleotide Therapeutics》^[3]

对该类药物的免疫原性风险评估给出了指导性建议

◆ Advances in Nucleic Acid Therapeutics（2019）^[4]

本书 20.6.2 章节系统性介绍寡核苷酸药物给药后对机体先天免疫和适应性免疫产生的免疫作用。

◆ Considerations in the Immunogenicity Assessment Strategy for Oligonucleotide Therapeutics (ONTs)（2022）^[5]

文章强调应精心设计临床免疫原性评估策略，以便在产品开发过程中准确、适当地监测潜在的免疫原性，并将其风险降至最低。本文从产生免疫原性的因素、试验设计，样品采集、分析方法等方面介绍寡核苷酸药物的免疫原性。

◆ 2022 White Paper on Recent Issues in Bioanalysis: FDA Draft Guidance on Immunogenicity Information in Prescription Drug Labeling, LNP & Viral Vectors Therapeutics/Vaccines immunogenicity, Prolongation Effect, ADA Affinity, Risk-based Approaches, NGS, qPCR, ddPCR Assays^[6]

2022 年 WRIB 工业界对寡核苷酸药物免疫原性评估给出如下建议：

◆ OSWG Recommended Approaches to the Nonclinical Pharmacokinetic (ADME) Characterization of Therapeutic Oligonucleotides（2023）^[1]

OSWG 在本文中对寡核苷酸药物免疫原性给出如下建议：

◆ Cross‐Reactive Polyclonal Antibodies Raised Against GalNAc‐Conjugated siRNA Recognize Mostly the GalNAc Moiety^[7]

本文通过动物免疫产生了抗 GalNac-siRNA 多克隆抗体，通过试验证明可以用作同类 GalNAc- siRNA 的免疫原性试验阳性对照。

免疫原性评估

寡核苷酸药物给药后机体会对载体、骨架、核酸序列或药物整体产生免疫反应。在产品开发早期可基于产品风险参考 FDA 治疗性蛋白产品免疫原性评估指南^[8]对寡核苷酸药物非临床和临床免疫原性进行评估。FDA 指南《Clinical Pharmacology Considerations for the Development of Oligonucleotide  Therapeutics》^[3]建议在对寡核苷酸药物进行免疫原性风险评估时，需将以下因素纳入考量范围：

免疫原性考量

免疫原性评估最佳实践

FDA 《Clinical Pharmacology Considerations for the Development of  Oligonucleotide Therapeutics》^[3]指南建议：

对杂质免疫原性的担忧

对于核苷酸仿制药物，如果活性分子相同，则剩余的不确定因素大多数是由杂质引起的，杂质可以改变免疫反应的程度和性质。

寡核苷酸药物不同于多肽类产品，确认其是否含有先天免疫反应调节杂质（IIRMI）是关键。需要基于检测目的，建立合适的分析方法。方法的关键信息包括：灵敏度、特异性、精密度、合适的质控、接受标准、可行性等。

已公布的寡核苷酸药物的免疫原性信息显示，ADA 发生率分布从非常低到很高(4%~72%)，但对临床疗效或安全性的影响有限。目前已获得数据表明，寡核苷酸药物普遍具有较低的免疫原性风险，对 PK、PD 和安全性尚未发现较大影响。下面是3个已批准寡核苷酸药物资料中免疫原性的案例。

Onpattro™(patisiran)药物案例研究

Onpattro™(patisiran)是一种脂质复合物注射液，将 siRNA 包裹在脂质纳米颗粒（LNP）中，分子量约为 14kD，静脉输注后递送至肝脏细胞内，靶向 TTR mRNA 以抑制 TTR 的产生。2018年获得 FDA 批准用于治疗成人遗传性甲状腺转体介导的淀粉样变(hATTR)，是首个获批的 siRNA 治疗药物（关于临床开发路径，点击详见往期文章）。

Spinraza^® (nusinersen)药物案例研究

Spinraza^® (nusinersen)是一种含有 18 个碱基残基的硫代反义寡核苷酸，可修饰 SMN2 基因的前信使 RNA 剪接，从而促进全长 SMN 蛋白的产生。2016年获得 FDA 批准，腰椎穿刺鞘内给药，用于治疗儿童或成年患者脊髓性肌萎缩症(SMA)。

基于上述，FDA 要求在上市后评估 ADA 阳性样品中 dsDNA 的交叉反应性。免疫原性检测方法采用过氧化物酶偶联的重组蛋白 A/G 为检测抗体，蛋白质 A/G 主要结合人类 IgG，因此实际的 ADA 发生率可能比报道的要高或发生得更早^[10]。

Oxlumo^®（Lumasiran）药物案例研究

Oxlumo^®（Lumasiran）是一种皮下注射的合成 siRNA，与 GalNAc 配体结合，可抑制羟基酸氧化酶1（HAO1）基因的 mRNA。2020 年获得 FDA 批准用于治疗儿童和成人患者的原发性高草酸尿症1型（PH1）（关于临床开发路径，点击详见往期文章）。

采用经验证的 ELISA 法检测人血清中抗 Lumasiran IgG/IgM 抗体。该方法可以检测抗 GalNAc 抗体、抗双链 siRNA 抗体和连接体抗体。方法灵敏度为 65.6 ng/mL，MRD 确定为1:50。样品检测中直接对筛选 ADA 阳性样品进行 ADA 滴度检测。

随着越来越多采用新型结构修饰和作用机制的寡核苷酸药物研发的快速推进，免疫原性评估仍面临诸多挑战。一方面，我们需要进一步优化评估策略，综合考虑药物的化学结构特征、修饰类型、给药途径等因素，制定个性化的免疫原性评估方案；另一方面，应加强杂质成分对免疫原性潜在影响的研究，建立更加灵敏、特异的检测方法，确保药物质量和临床用药的安全性。此外，在产品研发的不同阶段，我们还应结合实际需求，制定高效、经济的方法开发和样品检测方案。

特别值得重视的是，不管是在非临床研究还是临床试验中，对于免疫原性的评价，不仅是分析方法精益求精的追求，更重要的是要着眼于免疫原性对产品有效性和安全性影响的评估；同时，这种以评估为导向的免疫原性研究恰恰构成了免疫原性风险评估和研究策略制定的基石。