该指南共分为 14 个章节，简述如下：

ONTs 是一类具有独特特性的药物，现有的小分子药物和治疗性蛋白质的指导原则可能不完全适用。因此，FDA 发布本指南草案，以提供针对 ONTs 非临床安全性评价的详细建议。

指南涵盖了合成或天然来源的单链或双链 ONTs，包括具有天然或修饰骨架或核苷酸结构的 ONTs。这些结构可以增加或减少蛋白质的表达和功能，例如 ASO、siRNA、microRNA、transfer RNA、Decoys 和 Aptamers等。免疫调节性寡核苷酸（如通过 Toll 样受体作用的 CpG 基序）以及 CBER 监管的产品（如 DNA/RNA 疫苗、病毒传递的 ONTs、信使 RNA 和用于基因编辑的 RNA）不在本指南范围内。

ONTs 可能通过多种 MOA 实现其预期的药理效应。最常见的是，ONTs 包含与细胞内目标核酸序列互补的核苷酸序列，该序列可通过 Watson-Crick-Franklin 碱基互补配对结合，从而通过各种下游机制（如反义、沉默）影响特定基因的表达。某些 ONTs（如适配体）设计为通过与特定蛋白质或其他细胞成分的序列依赖但非杂交依赖的方式结合来发挥药理作用。

• 在靶效应 On-target effects（放大的药理学效应）

建议评估因靶向活性（放大的药理学效应）导致的潜在不良反应。通常，需要在至少 1 个种属中使用临床候选分子进行评估，特别是当可获得对临床候选分子具有药理响应的动物种属时。如不可行，可以使用合适的替代分子。

• 杂交依赖性脱靶效应 Off-Target Hybridization-Dependent Effects
  

由于 ONTs 能够形成 Watson-Crick-Franklin 碱基对，可能与部分或完全互补的非靶RNA或DNA序列结合，从而导致不良反应，这些反应可能在毒理学研究中检测到。因此，应使用适当的in silico 和 in vitro 方法对 ONTs 进行序列依赖的脱靶效应评估，以识别潜在的脱靶杂交。

• 杂交非依赖性脱靶效应 Off-Target Hybridization-Independent Effects

通过与核酸结合发挥作用的 ONTs 也可能直接与蛋白质或其他细胞成分相互作用。尽管这种相互作用不涉及核酸碱基配对，但仍可能是序列依赖性的。此外，某些 ONTs（如 Aptamer），通常不直接与其他核酸相互作用，也可能表现出杂交非赖的脱靶效应。

主要药理学研究应考察 ONTs 与其预期治疗靶点的关系及其作用机制，该研究可提供药效作用持续时间和剂量依赖性相关的信息。对于高度特异性的人类靶点，ONTs 可能在动物种属中无药理活性，此时可考虑使用具有活性的替代分子。体外试验可使用人类细胞或表达人类靶点的转基因动物，或敲除目标序列的动物，这些模型也可以提供有关 ONTs 潜在生物学效应的信息。

ONTs 的安全药理学评估应关注药物活性物质对重要功能的影响，通常包括心血管、呼吸和中枢神经系统。建议采用药理学相关种属进行评估；如果没有药理学相关种属，FDA 建议仍需对可能的脱靶效应进行评估。安全药理学评估可以在单独的研究中进行，也可以伴随在单次或重复给药毒性试验中进行。

与其他试验药物一样，FDA 建议对 ONTs 的非临床吸收、分布、代谢和排泄特征进行考察，以支持非临床安全性评价。在启动人体临床试验之前，应在用于重复给药毒性试验的种属中获得系统暴露的数据。ONTs 应采用预期的临床途径给药，如采用不同的给药途径，应提供科学依据。

ONTs 的毒性研究通常应在 2 个种属中进行：一个啮齿类动物和一个非啮齿类动物，其中至少应有 1 个种属是药理相关的。如没有药理学相关种属，也建议在 2 个种属中对临床候选分子进行评估以考察杂交非依赖性脱靶效应。如果使用替代分子，动物研究应包括给与临床候选分子和替代分子的组别。

首次人体试验的剂量应根据 FDA Guidance 《Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers》（2005年7月）的一般原则进行设置。通常，合理的起始剂量推荐采用预期不超过最相关（或更敏感）种属 NOAEL 十分之一的暴露量，通常推荐通过以 BSA 标准化的 HED 进行估算*。

仅由天然核酸组成的 ONTs 不需要进行遗传毒性试验。含有非天然核酸、骨架结构或其他结构（如偶联物或连接子）的 ONTs 应评估其遗传毒性潜力。

ONTs 的生殖和发育毒性评估建议遵循 ICH S5（R3）进行。

申请人应遵循 ICH S1A 确定是否需要开展致癌性研究。对于用于慢性疾病治疗的 ONTs，大多数情况下应进行致癌性评估。

局部耐受性通常可以整合在单次或重复给药毒性试验中进行。对于采用了复杂递送载体的 ONTs。如可行，建议在毒性研究中对完整的临床候选药物的制剂处方进行局部毒性考察。

ONTs 的免疫毒性评估应遵循 ICH 和 FDA 相关指南。某些类型的 ONTs 已知会激活先天免疫系统（如巨噬细胞、组织细胞、补体）。尽管通常无需开展专门的免疫毒性评估，但在一般毒性研究中评估 ONTs 诱导的免疫效应（如细胞因子、补体）可以提供有用的信息。

应参考 ICH S10 进行光安全性评价。如果 ONTs 的紫外-可见光吸收仅由天然核酸碱基引起，则无需进行额外的光安全性评价。

通常，ONTs 非临床研究应采用与临床试验拟用样品相同的递送用制剂配方和方法。在某些情况下，新型辅料的毒性可以通过单独的辅料研究进行评估。如果 ONTs 与另一种分子（如肽或碳水化合物成分）偶联，则应在非临床研究中采用偶联 ONTs。

ONTs 产品的杂质水平应得到充分控制，并证明不会引起安全问题。ONTs 的杂质可以分为两类：寡核苷酸相关杂质和其他杂质（如有机小分子杂质、残留溶剂、元素杂质）。

对于开发儿科适应症的 ONTs，评估幼龄动物研究的需求时，应遵循 ICH S11。

FDA 的这一指南草案为寡核苷酸药物的非临床安全性评价提供了详细的指导，有助于确保这些新型药物的安全性和有效性。

欢迎行业内的专家和相关人员在 60 天内提交意见和建议，以进一步完善该指南。